细胞冻存dmso加多少ml

      冻存:吸去培养基-pbs洗-胰酶消化-加培养基终止消化-离心-冻存液重悬(可以直接放入-80过夜然后放入液氮)

      复苏:用培养基直接吹打冻存管里的细胞快速融化-离心-培养基重悬-移到培养瓶或皿中-晃匀-培养

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       细胞冻存液怎么配?

细胞培养时,DMSO的浓度是多少?

      DMSO一般用于细胞冻存保护剂和药物溶剂。

      用作细胞保护剂的机理是,DMSO能在细胞膜上打洞,使细胞内的水分子能渗透出来,从而防止细胞冷冻过程中在细胞内形成冰晶、破坏细胞结构。过高浓度的DMSO会对细胞造成损伤,一般冻存操作采用的终浓度是10%。

      其用作药物溶剂时,需要考虑DMSO具有诱导白血病细胞向红系分化和抑制某些细胞增殖的作用,可根据实验用的细胞类型做文献调研(一般建议低于0.5%),摸索合适的DMSO的用量。

细胞培养时,DMSO的浓度是多少?

      一般用DMSO和乙醇作为溶剂时,要求染毒时其浓度不超过0.1%。你可以配制成高浓度的母液,稀释时取少量到培养基中。冻存时DMSO的浓度为10%。

细胞冻存液怎么配?

      1.配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液;

      2.取对数生长期的细胞,去除旧培养液,用PBS清洗。

      3.去除PBS,加入适量胰蛋白酶(覆盖培养皿表面)把单层生长的细胞消化下来;

      4.离心1000rpm,5min;

      5.去除胰蛋白酶,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml;

      6.将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5ml;

      7.在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者;

      8.冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。