怎样调整细胞密度

高细胞密度发酵技术有何特点?

高密度发酵又称为高细胞密度发酵，是指在一定的培养条件和体系内,在不影响胞内产物积累的基础上,尽可能多的积累生物量，从而可以获得更多或更高效目标产物的发酵技术。

高密度发酵技术通过提高单位体积培养液中菌体的浓度，进而提高体积产率；相应的缩小反应器体积的同时，也缩短了生产周期，在相对较短的时间内得到大量的蛋白。

细胞计数板计算公式？

当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：

1.将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2.将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3.计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算：

细胞数/mL=四大格细胞总数/4×10个/ml

(注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m×16即每个格的平均值。所以，细胞密度=m×16×10个/ml)

说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以10因为计数板中每一个大格的体积为：

1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm

而1ml=1000ul=1000mm

（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。）

293T细胞到底该怎么养啊！?

图1：ATCC中293T细胞形态

293细胞中转入SV40T-ANTIGEN基因形成的高转染效率衍生株，即为293T细胞系。包含SV40-ORI的质粒能够在该细胞系中显著扩增，从而促进表达载体的扩增，促进蛋白的表达。293T细胞除了可用于各类基因表达及蛋白生产，还可用于高滴度逆转录病毒及其他病毒生产，如腺病毒及其他哺乳动物病毒。

本文为大家介绍293T的培养条件及注意事项：

>>>Cellcook<<<

图2：293T细胞形态

一、细胞特性

细胞贴壁性较差，容易飘起来；

增殖迅速，倍增时间约为20h；

融合率不可过高，需要及时传代。

二、培养条件

培养体系

DMEM,HIGHGLUCOSE(GIBCOCAT:11995,或同配方)+10%胎牛血清(南美级别）

传代比例

1:3-1:5传代（培养面积比）

注：可根据实验所需细胞量对传代比例进行调整，但不可过低，细胞密度太低时生长缓慢。

高细胞密度发酵技术有何特点?

高细胞密度发酵(highcelldensityfermentation，HCDF)是应用一定的培养技术和设备来提高菌体生物量与目标产物比、获得高外源蛋白产率的发酵术。其发展至今仅20年左右历史，最简单的应用例子是生产面包酵母，利用烷烃或有机废水生产单细胞蛋白也是该技术的雏形应用实例。随着许多重要工业微生物的遗传背景和生理特性被逐渐认识，高细胞密度发酵技术也在该基础上拓展了其应用领域。引自黄莉娟《高细胞密度发酵技术的研究进展》。

高细胞密度概念

高细胞密度是一个相对概念，一般认为上限值为150～200g/L，下限值为20～30g/L，但是对于一些极端微生物或自养微生物，细胞浓度如果达到1g/L也可算高细胞密度。广义来讲，凡是细胞密度比较高，以至接近其理论值均可称为高细胞密度。

高细胞密度发酵的优点

利用高细胞密度发酵技术可以提高单位体积培养液中菌体的浓度，进而提高体积产率;相应的缩小反应器体积，缩短生产周期，减少设备投资;强化后续分离提取，并在一定程度上减少废水量;降低生产成本，提高综合生产效率。

高细胞密度发酵的应用领域

1、在生物制品中的应用

试验研究表明，高密度发酵技术在利用工程菌生产各种干扰素、生长因子、生物酶、肽类、多糖等活性成分过程中得到了广泛应用。

2、在食品工业中的应用

高细胞密度发酵技术可用于活细胞(即为所需产物)的培养，如通过改善培养环境和调控方式得到乳酸菌的高密度发酵，应用于乳制品行业。另外，高细胞密度发酵还可用于酵母菌生产酒精和利用螺旋藻细胞生产螺旋藻等。